靈芝對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響 |
【 整理發(fā)布:王力野生靈芝網(wǎng) 】 【 發(fā)布日期:7/6/2011 】 瀏覽次數(shù):2128 |
 |
本文研究在日本培植的靈芝(Ling Zhi, LZ, Ganoderma Lucidum, Fr. Karst)的熱水提取物對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響。測(cè)定靈芝單獨(dú)及聯(lián)合Con A或Lps對(duì)小鼠脾細(xì)胞攝取3H-TdR的作用。靈芝口服300mg/kg qd.×10或在試管內(nèi)10~500μg/ml對(duì)淋巴細(xì)胞增殖有直接刺激作用,更高濃度(1000μg/ml)則產(chǎn)生抑制效應(yīng)。凍融部分較水溶部分的作用為強(qiáng)。靈芝對(duì)Con.A誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖具有雙向調(diào)節(jié)作用,這主要與靈芝和Con A的濃度有關(guān)。一般而言,靈丹妙藥芝對(duì)于由亞適劑量Con A(0.625μg/ml)引起的淋巴細(xì)胞增殖起促進(jìn)作用;但當(dāng)細(xì)胞受適量Con A(2.5μg/ml)刺激而高度激活時(shí),則起抑制作用,且作用與藥物濃度呈依賴關(guān)系。
對(duì)于由環(huán)磷酰胺引起免疫抑制的小鼠,靈芝可使被抑制的淋巴細(xì)胞增殖速度加快。但是靈芝在整體及試管內(nèi)對(duì)于由Lps誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖并無(wú)刺激作用。這說(shuō)明靈芝對(duì)B細(xì)胞的作用可能與對(duì)T細(xì)胞的作用機(jī)理不盡相同。
關(guān)鍵詞 靈芝;淋巴細(xì)胞增殖
靈芝(Ling Zhi, LZ, Ganoderma Lucidum, Fr. Karst)是一種真菌,具有廣泛的藥理作用,長(zhǎng)期以來(lái)用作保健藥品。迄今有關(guān)其對(duì)免疫系統(tǒng)的作用研究不多,作用機(jī)理更不清楚。本文研究靈芝對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的作用。
材 料 與 方 法
動(dòng)物
昆明種小鼠,♂,18~22g,由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部供應(yīng)。
試劑
靈芝熱水提取物呈棕黃色粉末,由日本和漢生藥研究所提供。取定量靈芝提取物,經(jīng)研磨溶于含0.2%羧甲基纖維素鈉的生理鹽水,置80℃水浴震蕩4h,此制劑作整體研究用。如用于試管內(nèi)研究,則取少量(約10mg)靈芝提取物,溶于生理鹽水,在80℃水浴振蕩2h,然后離心(1600rpm 10min),取上清液保存于4℃,臨用前再適當(dāng)稀釋。此為靈芝的水溶性部分(Part A)。上述靈芝溶液在經(jīng)水浴振蕩后,置-30℃及37℃快速凍融3次,再離心取其上清液,即為靈芝提取物的凍融部分(Part B)。
RPMI-1640培養(yǎng)基,GIBCO產(chǎn)品,含Hepes 15mM,青霉素100 U/ml,鏈霉素100μg/ml,小牛血清10%,2-巰基乙醇5×10-5mmol。
刀豆蛋白A(Concanavalin A, Con A),脂多糖(Lipopolysaccaride, Lps)均為Sigma產(chǎn)品。
3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)為中科院原子核研究所產(chǎn)品,比活性為1110 GBq/mmol。
試管內(nèi)淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)
小鼠以頸椎脫位致死,無(wú)菌取脾臟,分離脾細(xì)胞,尼龍網(wǎng)過(guò)濾,蒸餾水破壞紅細(xì)胞,調(diào)節(jié)至等滲,以RPMI-1640培養(yǎng)液洗三次,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為1×107/ml。于96孔培養(yǎng)板,每孔加入1×106個(gè)細(xì)胞、不同濃度的靈芝溶液?jiǎn)为?dú)或聯(lián)合Con A和Lps。置37℃ 5%CO2
培養(yǎng)箱48h。培養(yǎng)終止前6h,每孔加入3H-TdR 9.25 KBq,用多頭細(xì)胞收集儀將細(xì)胞收獲至醋酸纖維薄膜,β-液閃儀測(cè)定3H-TdR的摻入值,以t試驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,每個(gè)條件復(fù)孔三個(gè)。
整體研究淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)
小鼠隨機(jī)分組,對(duì)照組口服0.2 CMC 0.5ml qd.×10;治療組口服靈芝300mg/kg,qd. ×10。按上述方法制備脾細(xì)胞,同上法培養(yǎng)后測(cè)定。
對(duì)免抑制小鼠的作用
小鼠40只,陰機(jī)分為4組。對(duì)照組口服靈0.2%CMC0.5ml/鼠,qd. ×10;環(huán)磷酰胺組腹腔注射10mg/kg qd.×5。靈芝兩組分別口服靈芝150、300mg/kg,qd.×10同時(shí)腹腔注射環(huán)磷酰胺10mg/kg qd.×5。按上法制備脾細(xì)胞及測(cè)定。
結(jié) 果
靈芝在試管內(nèi)對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響
在無(wú)致裂原存在條件下,靈芝Part A 1~500μg/ml或Part B 1~10μg/ml單獨(dú)均可
刺激淋巴細(xì)胞攝取3H-TdR。但在更高濃度如Part A 1000μg/ml或Part B 100μg/ml以上則轉(zhuǎn)為抑制作用。由表1-1可以看出Part B的作用比Part A強(qiáng),在較低濃度即開(kāi)始轉(zhuǎn)向抑制。
表1-1 靈芝對(duì)試管內(nèi)淋巴細(xì)胞增殖的作用
藥物濃度 cpm/1×106細(xì)胞
(μg/ml) Part A Part B
0 2991±445 2991±445
1 3744±529 11208±554**
10 5997±699** 10532±1301**
100 8054±1013** 1595±18*
500 7668±1181** 1552±264*
1000 1126±156** 499±48**
Part A:水溶部分;PartB:凍融部分。X±SD;n=3;*P<0.05;**P<0.01
靈芝對(duì)于由Con A誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖的影響與Con A的濃度密切相關(guān),靈芝無(wú)論是Part A與Part B在1~500μg/ml均促進(jìn)由低濃度Con A(0.625μg/ml)誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖,作用與藥物濃度呈依賴關(guān)系。靈芝于更高濃度(>500μg/ml)時(shí)則轉(zhuǎn)向抑制效應(yīng)。
當(dāng)淋巴細(xì)胞受適量Con A(1.25μg/ml)刺激時(shí),靈芝作用介于上述兩者之間。其規(guī)律與低濃度Con A組相似,即低濃度靈芝呈刺激作用,而高濃度呈抑制作用(表1-2)。
表1-2 靈芝對(duì)Con A誘導(dǎo)的試管內(nèi)淋巴細(xì)胞增殖的作用
藥物濃度 cpm/1×106細(xì)胞
(μg/ml) Con A 0.65μg/ml Con A 1.25μg/ml Con A 2.5μg/ml
Part A 0 3589±44 19559±3087 69991±1894
1 5886±3020 35293±9642 58956±12175
10 13366±5995* 19954±8656 38487±2523*
100 19788±4285** 16944±6768 28640±10150**
500 9375±1677* 4948±2044** 15496±1254**
1000 984±117** 764±166** 4732±832**
Part B 1 16546±3217** 20509±4701 26034±7193**
10 15944±4801* 61059±5666** 35337±13165*
100 7407±585** 56432±7227** 17476±281**
500 4196±460** 4512±470** 16996±4123**
1000 685±28** 1918±98** 7347±825**
Part A:水溶部分;PartB:凍融部分。X±SD;n=3;*P<0.05;**P<0.01
靈芝在試管內(nèi)對(duì)于由5或10μg/ml Lps引起的淋巴細(xì)胞增殖主要呈現(xiàn)抑制作用。已知Lps為B細(xì)胞刺激劑,而Con A為T細(xì)胞刺激劑,由此可見(jiàn)靈芝對(duì)T與B細(xì)胞的作用不同(表1-3)。
表1-3 靈芝對(duì)Lps誘導(dǎo)的試管內(nèi)淋巴細(xì)胞增殖的作用
藥物濃度 cpm/1×106細(xì)胞
(μg/ml) Lps 5μg/ml Lps 10μg/ml
Part A 0 37420±2780 63123±6025
1 27369±665** 34113±820**
10 25348±1950** 33771±6324*
100 25901±2187** 30656±4311**
500 22080±675** 24727±3412**
1000 3942±733** 11528±2865**
Part B 1 30051±3862 37491±8736*
10 35341±5173 44201±1813**
100 34057±4299 30985±6037**
500 20221±3601** 26271±1357**
1000 7288±778** 8983±1413**
Part A:水溶部分;PartB:凍融部分。X±SD;n=3;*P<0.05;**P<0.01
二、靈芝對(duì)小鼠整體淋巴細(xì)胞增殖的影響
研究證明口服靈芝300mg/kg qd.×10的小鼠即使在無(wú)致裂原存在條件下淋巴細(xì)胞增生也比對(duì)照組為快.靈芝明顯刺激由Con A 0.625~1.25μg/ml誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖。但在同一條件下對(duì)于由Lps 5或10μg/ml誘導(dǎo)的作用,靈芝卻呈現(xiàn)抑制效應(yīng)(表1-4)。
表1-4 靈芝對(duì)整體淋巴細(xì)胞增殖的影響
cpm/1×106 細(xì)胞
致裂原 μg/ml 0.2% CMC 300 mg/kg靈芝
-- -- 1338±94 2676±621**
Con A 0.625 4254±802 10168±1876**
1.25 21471±1563 42946±1001**
2.50 33685±1727 42031±9645
Lps 5 5427±996 420±186**
10 5963±30 339±4**
口服靈芝,qd.×10;X±SD; **P<0.01
三、靈芝對(duì)免疫抑制小鼠的作用
表1-5表明,環(huán)磷酰胺組在服藥后最初5天內(nèi)體重明顯低于對(duì)照組,以后又逐漸增加。但如聯(lián)合服用靈芝則在最初5天未見(jiàn)體重明顯下降。另外,環(huán)磷酰胺可使胸腺明顯縮小,重量減輕。靈芝使胸腺重量增加,300mg/kg劑量組與環(huán)磷酰胺組之前有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P<0.01)。
表1-5 靈芝和環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠體重、胸腺和脾臟重量的影響
藥 物 劑量 體重(g) 胸腺 脾臟
(mg/kg) d0 d5 d10 (mg) (mg)
0.2% CMC -- 24.0±1.5 28.0±1.6 29.7±1.9 79.1±25.2 89.5±18.2
環(huán)磷酰胺 10 24.2±1.8 23.3±2.1*** 28.8±2.0 40.8±17.4*** 113.7±43.9
環(huán)磷酰胺 10 24.5±1.8 28.0±2.1 29.8±1.6 54.8±23.2* 113.2±19.0**
+靈芝 150
環(huán)磷酰胺 10 24.7±1.4 29.8±1.3* 30.7±1.0 66.3±18.4△△ 125.6±30.2***
+靈芝 300
各組的的脾細(xì)胞進(jìn)行淋巴細(xì)胞增殖的研究,結(jié)果證明不論有無(wú)Con A或Lps存在,環(huán)磷酰胺(CYA)明顯抑制淋巴細(xì)胞增殖。但是靈芝聯(lián)合CYA組,淋巴細(xì)胞增殖明顯高于CYA組。與CYA單獨(dú)應(yīng)用組比較,150~300mg/kg靈芝顯著增加3H-TdR摻入(P<0.01)(表1-6)。
表1-6 靈芝與環(huán)磷酰胺聯(lián)合用藥對(duì)整體淋巴細(xì)胞增殖的影響
cpm/1×106細(xì)胞
致分裂劑 μg/ml 0.2% CMC CYA CYA+150mg/kg靈芝 CYA+300mg/kg靈芝
-- 4598±620 1992±342** 1527±190 1533±217
Con A 0.625 61403±10172 1475±159 7126±795 2684±58
1.25 83372±12369 1169±337 16231±5368 6655±2250*
2.5 84917±23495 3565±435 56274±12847 6559±1915
Lps 5 14003±3094 87±12** 4142±214** 763±43**
10 16845±2175 99±24** 3098±612** 460±27**
**
討 論
無(wú)論試管內(nèi)或整體研究均證明適量的靈芝可以直接刺激淋巴細(xì)胞增殖,高濃度則產(chǎn)生抑制。靈芝對(duì)T細(xì)胞的增殖作用決定于兩個(gè)主要的因素,一是細(xì)胞的狀態(tài),另一是所用靈芝的濃度。靜止的T細(xì)胞,或?yàn)閬嗊m劑量Con A輕度激活的細(xì)胞,靈芝可以增強(qiáng)Con A的作用而促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖。但是如果T細(xì)胞受適量Con A刺激而高度激活時(shí)則靈芝抑制淋巴細(xì)胞增殖。Lps是一致裂原,主要刺激B細(xì)胞,對(duì)正常小鼠所整體研究以及試管內(nèi)研究均證明由Lps誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖,靈芝主要呈現(xiàn)抑制效應(yīng)。已知環(huán)磷酰胺是一種免疫抑制劑,能抑制體液或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能,抑制由Con A 或Lps誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖。靈芝則能對(duì)抗環(huán)磷酰胺的免疫抑制作用而促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖。
根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果,提示靈芝具有免疫調(diào)節(jié)作用,也許對(duì)于免疫功能受抑制的病人會(huì)有幫助,但應(yīng)考慮所用劑量。 |
|
|
|